1.Lactose Broth Single Strength (LBSS), Tiap tabung 10 ml
2.Lactose Broth Triple Strength (LBTS), Tiap tabung 5 ml
3.Briliant Green Lactose Bile Broth (BGLBB), Tiap tabung 10 ml
4. Media Mac Conkey/TBX/Endo Agar/Eosin Methilen Blue Agar/Tergitol 7 agar plate
5.Media Gula-gula (Gulukosa, laktosa, manitol, maltose, sakarosa)
6. Sulfur Indole Motility(SIM)
7. Triple Sulfur Iron Agar (TSIA)
8. Simmon’s Citrat (media no 4 s/d 8 digunkan untuk identifikasi E.coli)
Ragam pemeriksaan MPN yaitu :
a. Ragam I : 5x10 ml, 1x1ml, 1x0,1
Ketentuanya, Spesimen cair atau yang dilarutkan ditanam dalam :
-5 tabung LBTS diisi sampel masing masing 10 ml
-1 tabung LBSS diisi sampel masing masing 1 ml
-1 tabung LBSS diisi sampel masing masing 0,1 ml
Tujuan : Pemeriksaan MPN specimen yang telah diolah atau angka kuman diperkirakan rendah
b. Ragam II : 5x10 ml, 5x1ml, 5x0,1ml
Ketentuanya,Spesimen cair atau yang dilarutkan ditanam dalam :
-5 tabung LBTS, masing-masing 10 ml
-5 tabung LBSS, masing-masing 1 ml
-5 tabung LBSS, masing-masing 0,1 ml
Tujuan: Pemeriksaan MPN specimen yang belum diolah atau angka kuman diperkirakan tinggi
b. Ragam III : 3x10 ml, 3x1ml, 3x0,1ml
Ketentuanya, spesimen cair atau yang dilarutkan ditanam dalam :
-3 tabung LBTS, masing-masing 10 ml
-3 tabung LBSS, masing-masing 1 ml
-3 tabung LBSS, masing-masing 0,1 ml
Tujuan : Alternatif ragam II jika tabung dan jumlah media terbatas
Cara Kerja
Ragam I
1. Spesimen yang sudah ditanam dalam tabung LBTS dan LBSS, sesuai ketentuan diinkubasi 37 0C selama 48 jam
2. Tiap tabung yang menunjukkan gas positif, ditanam kedalam Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGLBB), diinkubasi 37 0C selama 48 jam
3. Dibaca dan dicatat BGLBB yang menunjukan positif gas, sebelum di cari nilai Index MPN harus dipastikan apakah bakterinya E. coli atau bukan
Caranya :
1) Larutan dari tabung BGLBB yang positif gas ditanam dimedia Mac Conkey/TBX/Endo Agar/Eosin Methilen Blue Agar/Tergitol 7 agar plate, inkubasi 37 0C 24 jam
2 ) Koloni yang tersangka E.coli ditanam dimedia gula-gula, SIM, TSIA, SC, (bisa ditambah dengan penanaman di Nutrien Agar untuk subkultur), inkubasi 37 0c 24 jam
3) Dibaca pertumbuhan dimedia
Gula-gula: + (+g), +, +, +, + (Kanan → kiri : Glukosa, laktosa, manitol, maltosa, sakarosa)
SIM : H2S (-), Indol (+), Motilitas (+)
TSIA: Lereng/Dasar (K/K), Gas (+), H2S (-)
SC : (-)
4. BGLBB yang menunjukkan gas positif (point no 3) dan telah di pastikan positif E.coli, Di cari nilai Index MPN-nya pada table PMN atau menggunakan Rumus .
Rumus Index MPN per 100 ml
(A+B+C) X (√S x N)-1 X 100 = …….
Keterangan
A = Jumlah tabung (+) gas penanaman kelompok pertama
B= Jumlah tabung (+) gas penanaman kelompok kedua
C= Jumlah tabung (+) gas penanaman kelompok ketiga
S= Jumlah ml sampel yang ditanam
N= Jumlah ml sampel yang negatif
Perhitungan index MPN bisa juga dilakukan dengan Formula Thomas...
Catatan :
-Untuk MPN E.coli cara kerja Ragam II dan Ragam III sama seperti ragam I (perbedaan hanya pada ketentuan ragam)
-Apa bila semua tabung BGLBB menunjukkan hasil (+) gas, perlu dilakukan penanaman ulang dengan specimen yang diencerkan 10X atau 100X lebih rendah dari yang sebelumnya. Hasil MPN dikali dengan besar pengenceran
-Pemeriksaan MPN coliform dan coliform tinja hampir sama dengan pemeriksaan MPN E. coli, Tapi pada pemeriksaan MPN coliform dan coliform tinja tidak perlu dilakukan identifiksi/pemastian jenis bakteri. Pemeriksaan MPN coliform (BGLBB diinkubasi pada suhu 37 derjat C selama 48 jam), dan untuk pemeriksaan MPN coliform tinja (BGLBB diinkubasi pada suhu 44-44,5 C selama 24 jam).
DOWNLOAD
2 komentar:
Menarik neh infonya, saya juga beraktifitas di lab daily di cehmical but momentum juga ke mikro klo ada profisiensi...
Teknisi laboratorium ya mbak??Kl saya analis kesehatan,,teknisi laboratorium kesehatan/klinik baru lulus kuliah bulan ini...
Posting Komentar
Jangan Lupa Kasih Komentar Yah,,Teman